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dc.contributor.advisorArévalo Pinzón, Gabriela
dc.contributor.advisorSánchez Mora, Ruth Mélida
dc.contributor.authorOrtiz Gordillo, Juliana
dc.date.accessioned2021-06-11T21:06:34Z
dc.date.available2021-06-11T21:06:34Z
dc.date.issued2019-12
dc.identifier.urihttps://repositorio.unicolmayor.edu.co/handle/unicolmayor/227
dc.description.abstractLa invasion de esporozoitos de Plasmodium spp a hepatocitos humanos representa el primer paso para que se establezca la invasion en el humano, esto ocurre mediante la interacción de proteínas de la superficie del esporozoito y receptores en la superficie del hepatocito. La proteína anónima relacionada con trombospondina de Plasmodium vivax (PvTRAP) es un polipéptido presente en la superficie de esporozoítos, del cual en otras especies de Plasmodium se ha investigado su participación en el proceso de invasión al hepatocito. Esta proteína es conservada en varias especies del género Plasmodium caracterizándose por la presencia de un dominio de repetición de trombospondina tipo I (TSR) y un dominio A similar al Factor von Willebrand (vW). En el presente estudio se amplificaron dos fragmentos del gen pvtrap que codifican para el ectodominio de la proteína PvTRAP y los dominios TSR-vW. Cada producto fue clonado en el vector pFastBac-HT-C y secuenciado mediante la técnica de Sanger, obteniendo por primera vez la secuencia de nucleótidos y aminoácidos de la proteína PvTRAP derivada de la cepa VCG-1. Los clonos recombinantes confirmados fueron utilizados para la obtención de baculovirus recombinantes en células de insecto Sf9. Una alta concentración de stock viral fue utilizada para la expresión de los dos fragmentos recombinantes: PvTRAP y PvTRAP-vW-TSR. El ectodominio PvTRAP se purificó mediante cromatografía de afinidad, se dializó exhaustivamente frente a PBS y se cuantificó. Mediante ensayos de citometría de flujo se encontró que la proteína PvTRAP se unió a la línea celular hepática ATCC HB-8065. Futuros estudios son necesarios para evaluar las regiones mínimas de interacción con el fragmento PvTRAP-vW-TSR. Los resultados de este estudio destacan la capacidad de PvTRAP para interactuar con la célula blanco de P. vivax y pone en evidencia el potencial de esta polipéptido en P. vivax como ha sido mostrado para P. falciparum.spa
dc.description.tableofcontentsResumen 9 Introducción 10 1. Antecedentes 11 2. Marco teórico 16 2.1. Generalidades 17 2.2. Epidemiología 17 2.2.1. Malaria a nivel mundial 18 2.2.2. Malaria en Colombia 19 2.3. Ciclo de vida 21 2.3.1. Invasión al hepatocito 22 2.3.2. Invasión al Glóbulo Rojo 23 2.3.3. Ciclo en el mosquito 24 2.4. Sistemas de expresión de proteínas Recombinantes 25 2.4.1. Sistemas de expresión en células de mamífero 26 2.4.2. Sistema de expresión en Baculovirus 27 3. Objetivos 29 4. Metodología 30 4.1. Diseño de cebadores 30 4.2. Amplificación de dos regiones del gen pvtrap por reacción en cadena de la polimerasa 31 4.3. Clonación de los productos amplificados pvtrap y pvtrap-vW-tsr 33 4.3.1. Tratamiento enzimático de los productos amplificados (pvtrap, pvtrap-vW-tsr) y del vector pFASTBac-HT-C 33 4.3.2. Ligación de los genes pvtrap y pvtrap-vW-tsr en el vector pFASTBac-HT-C y transformación en células E. coli TOP10 competentes 33 4.3.3. Análisis de colonias recombinantes mediante PCR y tratamiento enzimático 34 4.4. Generación de bácmidos recombinantes en células E. coli DH10Bac competentes 35 4.4.1. Análisis de los bácmidos recombinantes por PCR 35 4.5. Cultivo de la línea celular de insecto Sf9 36 4.6. Transfección de células de insecto Sf9 con los bácmidos recombinantes 36 4.7. Generación de stocks virales 37 4.8. Extracción de la proteína 38 4.9. Electroforesis en gel de poliacrilamida - dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) 39 4.10. Western Blot 39 4.11. Purificación de la proteína 40 4.12. Diálisis 40 4.13. Ensayo de unión de la proteína rPvTRAP a línea celular hepática ATCC® HB-8065 40 5. RESULTADOS 42 5.1. Generación de los plásmidos recombinantes pFastBac-pvtrap y pFastBac-pvtrap-vW-tsr en células E. coli TOP 10 competentes 42 5.2. Generación de bácmidos recombinantes en células E. coli DH10Bac competentes 48 5.3. Células Sf9 derivadas de Spodoptera frugiperda expresan exitosamente la proteína PvTRAP y PvTRAP-vW-TSR 49 5.4. La rPvTRAP se une a la línea celular hepática ATCC® HB-8065 53 6. Discusión 54 7. Conclusiones 58 8. Referencias 59spa
dc.format.extent68p.spa
dc.format.mimetypeapplication/pdfspa
dc.language.isospaspa
dc.publisherUniversidad Colegio Mayor de Cundinamarcaspa
dc.relation.ispartofNo objeto asociado
dc.rightsDerechos Reservados -Universidad Colegio Myor de Cundinamarca ,2019eng
dc.rights.urihttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/spa
dc.titleActividad de unión de la proteína adhesiva relacionada con trombospondina de Plasmodium vivax (PvTRAP) a células HepG2spa
dc.typeTrabajo de grado - Pregradospa
dc.contributor.researchgroupTrabajo de gradospa
dc.coverage.cityBogotá D.C.
dc.description.degreelevelPregradospa
dc.description.degreenameBacteriólogo(a) y Laboratorista Clínicospa
dc.description.researchareaTrabajo de gradospa
dc.identifier.barcode60150
dc.publisher.facultyFacultad de Ciencias de la Saludspa
dc.publisher.placeBogotá, Distrito Capitalspa
dc.publisher.programBacteriología y Laboratorio Clínicospa
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dc.rights.creativecommonsAtribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional (CC BY-NC-SA 4.0)spa
dc.subject.lembMalaria
dc.subject.lembEnfermedades transmisibles - Epidemiología
dc.subject.lembEpidemias
dc.subject.proposalPlasmodium vivaxspa
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dc.subject.proposalfase pre-eritrociticaspa
dc.subject.proposalEsporozoitospa
dc.subject.proposalInteracción receptor-ligandospa
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