Producción de bácmidos recombinantes del ectodominio de la proteína del circumsporozoito (EcCSP) y de la región ll de la proteína de Unión al Duffy (DBP-RII) de Plasmodium vivax.

Abstract

Plasmodium vivax es una de las especies más ampliamente distribuidas a nivel mundial, pero desafortunadamente no se ha podido investigar a profundidad los mecanismos de invasión debido a la incapacidad de realizar un cultivo continuo in vitro. Por lo tanto, es necesario encontrar diferentes alternativas para estudiar las interacciones del parásito con las células hospederas. Dentro de las estrategias abordadas por distintos investigadores, se encuentra la evaluación de las interacciones receptor-ligando mediante el uso de proteínas recombinantes derivadas de P. vivax y células hospederas. A partir de estos experimentos se han elucidado algunas interacciones claves en el proceso de invasión de P. vivax. Teniendo en cuenta que esta es una estrategia adecuada para medir las interacciones entre el patógeno y la célula hospedera, es necesario la producción de los controles de interacción positivos que puedan usarse para validar las nuevas interacciones de P. vivax. Motivo por el cual, este trabajo se enfocó en la producción de bácmidos recombinantes que contienen la región que codifica para el ectodominio de la proteína circumsporozoito (CSP) y de la región II de la proteína de unión a Duffy (DBP). Para esto, se amplificaron las dos regiones de cada proteína y se clonaron en el vector PfastBac-HTC obteniendo plásmidos recombinantes llamados pFastBacHT-C-EcPvCSP y pFastBacHT-C-PvDBP-RII, que se utilizaron para transformar células DH10Bac que contenían el DNA viral generando bácmidos recombinantes bMON14272-PvDBP-RII y bMON14272-EcPvCSP con una concentración para de 158,9 ng/μl y 430 ng/μl respectivamente, los cuales fueron aislados y serán utilizados en posteriores estudios para transfectar células Sf9, encargadas de la producción de las partículas virales y de la producción de las proteínas recombinantes. Estas proteínas serán utilizadas como controles para evaluar interacciones proteína-proteína de diferentes antígenos de P. vivax en busca de métodos de control contra esta especie parasitaria.

Plasmodium vivax is one of the most widely distributed species worldwide, but unfortunately it has not been possible to investigate in depth the mechanisms of invasion due to the inability to carry out a continuous culture in vitro. Therefore, it is necessary to find different alternatives to study the interactions of the parasite with host cells. Among the strategies addressed by different researchers is the evaluation of receptor-ligand interactions through the use of recombinant proteins derived from P. vivax and host cells. From these experiments some key interactions in the invasion process of P. vivax have been elucidated. Taking into account that this is a suitable strategy to measure the interactions between the pathogen and the host cell, it is necessary to produce positive interaction controls that can be used to validate the new interactions of P. vivax. This is why this work focused on the production of recombinant bacmids that contain the region that codes for the ectodomain of the circumsporozoite protein (CSP) and the region II of the Duffy-binding protein (DBP). For this, the two regions of each protein were amplified and cloned in the PfastBac-HTC vector obtaining recombinant plasmids called pFastBacHT-C-EcPvCSP and pFastBacHT-C-PvDBP-RII, which were used to transform DH10Bac cells that contained the viral DNA. generating recombinant bacmids bMON14272-PvDBP-RII and bMON14272-EcPvCSP with a concentration of 158.9 ng / μl and 430 ng / μl respectively, which were isolated and will be used in subsequent studies to transfect Sf9 cells, responsible for the production of viral particles and the production of recombinant proteins. These proteins will be used as controls to evaluate protein-protein interactions of different P. vivax antigens in search of control methods against this parasitic species.